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香樟组 培快繁技术研究进展

  香樟,古称“豫章”,为樟科 樟属亚热带常绿阔叶乔木。香樟材质优良,纹理雅致,香气浓郁,不仅是 提取纯天然香料的重要原料,也是城市绿化、园林景观的良好树种。据报道,现在提 取樟树香料已由过去砍伐大树提取,改为密植矮林、割取树叶提取的方式。但香樟采用扦插、嫁接等 无性养殖扩繁较困难,且母株材料来源有限,无法满 足规模生产的需要;种子养 殖则实生苗后代分离严重,多数劣变,且育苗时发芽迟缓,苗木参差不齐。而采用 离体培养不仅能实现工厂化生产优良香樟,而且能 够保持母本的优良特性。目前,国内对 香樟的组织培养已经进行了不少探索,并取得了一定的成效。为了更 好地推进香樟的生产发展,本文就 近年来香樟的组培快繁技术的研究进展作一综述。

法国冬青|香橼 
 

    无菌外植体的选择 
    目前,用于香 樟组织培养的外植体主要是幼叶、嫩茎、茎段、嫩芽和未成熟的幼胚。如王长宪等认为,由于香樟内生菌较重,因而采 用多菌灵溶液对3年生的 香樟树枝条进行催芽培养,结果表明:培养1周后多 数枝条开始萌芽,2周后新芽长到0.5一2.5cm;而吴幼 媚等则以当年萌发的嫩枝为外植体,研究发现,2月份无 菌活体的获取率最高,达60%;其次是3月,获取率为46%;而气温较高的6一9月,无菌活体获取率最低。 
    培养基配方选用 
    基本培养基 
    在香樟 组织培养过程中通常使用的基本培养基是MS、改良MS、1/2MS,按培养 目的的不同进行调整。吴金寿等认为,以改良Ms为基本培养基的组合,其诱导系数最高,苗况较好未见褐变;而以MS为基本 培养基的组合有褐变死亡现象:以1/2MS为基本 培养基的组合诱导系数最低,且茎叶变为枣红色。辜夕容等研究表明,全量Ms大量元 素的培养基为最适芽生长培养基,含半量MS大量元 素的培养基最适于香樟茎段的愈伤组织生长。索长江等研究认为,Ms加50一100mg/L的NaH2P04可提高丛生芽的质量,降低断 茎和叶褐死现象,同时高NH4+和NO3一是必需的。在MS培养基中加人Ca(NO3)2,一方面 可以给苗木提供更多的ca2+,同时N03一能促进植物对K+、ca2+、Mg2十等阳离子的吸收;另一方 面避免了初始芽的褐化。 
    外源激素 
    2.2.1外植体 的诱导香樟外植体诱导过程中施加的细胞分裂素一般选用6-BA,生长素一般选用NAA和IAA。吴金寿等研究表明,芳樟茎段用改良MS+6-BA2mg/L+NAA0.lmg/L固体培养基,诱导系数最高,培养巧d后陆续分化出不定芽,苗况较好未见褐变。王长宪等研究发现,香樟侧芽的分化受NAA的影响较大,在加人一定量的6-BA情况下,再加人0.1mg/LNAA对侧芽 诱导初分化效果明显;在对香 樟叶片愈伤组织诱导时,附加BA和2,4一D的配比为1:4能提高 愈伤组织的诱导率。辜夕容等则认为,6-BA浓度越高,对香樟 茎段上隐芽的萌动与伸长越有利,低浓度6-BA有利于 愈伤组织的生长;培养基中NAA浓度越高,香樟茎 段上愈伤组织长得越好,但过低 或过高则不利于香樟茎段隐芽的萌动与伸长,而在浓度适中(0.05mg/L)时,腋芽才长得最好;同时6-BA与NAA的浓度 比过低或过高均不利于香樟茎段隐芽的萌动与伸长,只有在6一BA/NAA为40时,萌出的腋芽最长,较低配 比则有利于促进愈伤组织的形成。因此认为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.O5mg/L为香樟 茎段初代培养的最适培养基,而l/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L可用于产生愈伤组织。吴幼媚等则认为6-BA4一5mg/L十IAA2mg/L是香樟 丛生芽诱导的理想激素组合。 
    2.2.2不定芽 的分化与增殖关于不同激素的配合使用及对香樟增殖率的影响,不同学 者有不同的观点。吴金寿等研究表明,基本培养基相同时,低比值的6一BA/IBA组合,芽苗增 殖系数明显较低;而高比值的6一BA/IBA组合,芽苗增殖系数较高,但6-BA含量太 高则易使茎段分化的芽苗基部后期部分愈伤组织化,影响株苗的正常发育;用改良MS+6-BA2mg/L+IBA0.lmg/L+GA30.2mg/L培养基 增殖芽苗较为理想,多芽段 材料明显比单芽段分化多,部分单 芽段还出现褐变死亡现象。在培养基中附加GA30.2mg/L可以克服褐变现象,但随着以3含量的升高,芽苗叶色趋淡,且伴有 玻璃化现象的产生,因此GA3质量浓 度最高不能超过0.2mg/L,且要与无GA3的培养 基隔代交替使用,以分化 更多健壮正常的不定芽,保证芽苗的生根成苗。王长宪等则认为,增殖的最佳培养基为Ms+6-BA5.0mg/L+IBA1.0mg/L。索长江等研究认为,在MS附加6-BA5mg/L十NAA0.5mg/L的培养 基上产生的丛生芽质量最好。辜夕容 等用增殖培养基MS+6-BA4.omg/L+NAA0.05mg/L,每隔30d继代1次,增殖倍数达5.06倍。吴幼媚等则认为,香樟组 培苗继代培养最适宜的外源激素配比是6-BA:IAA为3.5:2。 
    2.2.3壮苗与 生根培养索长江等研究认为,6-BA是具有 较强诱导能力的激素,但高浓 度使用会抑制生根和茎的伸长;把不定 芽苗在降低了激素浓度的MS培养基(MS+6-BA0.lmg/L+NAA0.O5mg/L)上培养 一段时间后转人MS+IBA0.5mg/L的生根培养基中(蔗糖改用食用白糖),生根率达80%。辜夕容 等用的生根培养基组成为l/2MS+IBA1.0mg/L+蔗糖20mg/L,2Od左右从 芽苗基部直接产生灰白粗壮的根系,生根率72%左右。吴幼媚等认为,在IBA3.0mg/L的培养 基内加人一定浓度的IAA或NAA,对香樟 不定根的诱导有促进作用,最适宜 诱导不定根的激素组合为IBA+NAA,浓度配比为3.0:1.5,其生根率达86.7%。吴金寿 等用生根培养基l/2Ms+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/L,芽苗生根率达100%,根、苗健壮,有须根。上述结果说明,IBA与NAA的配合 使用比单独使用IBA生根率高。 
    炼苗、移栽 
    当植株的根系长到0.5一1.0CM时,将瓶苗 置于大棚内炼苗20一30d,使苗木 木质化程度加强,提高对 自然环境的抵抗力。然后,将植株从瓶内取出,用自来 水清洗干净后移栽于塘泥(蛙石):砂土为1:2的灭菌基质中,置于温室中培养,温度20一25℃,相对湿度80%。成活率85%一90%。苗木移栽成活后(30~50d)移人网室培育。为培育壮苗,每隔5一6d施叶面肥(0.1%的多效丰产灵)1次,每15一20d施0.1%一0.5%复合肥液1次,定期喷0.1%的多菌灵、百菌清 或甲胺磷等药物。6月龄苗高15一18cm时出圃造林。 
    小结与展望 
    香樟的 组织培养是解决香樟种苗来源的一个重要途径,是实现 香樟种苗产业化生产的基础。虽然目 前有不少香樟组织培养获得成功的报道,但不同 学者间的观点还存在一定的分歧。对香樟 组织培养过程中出现的褐变、继代周期偏长、出现断茎等间题,还有待进一步研究。同时要 加强香樟遗传转化体系方面的研究,把香樟 的组织培养与基因工程、细胞工程结合起来,以创造 新的香樟优良品种.


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